流式細胞儀FACSVerse可以檢測（單克隆抗體）。儀器適用范圍：流式細胞儀結合定量熒光細胞化學方法，單克隆抗體和免疫熒光染色原理和技術，對快速流動液體中的單細胞的多種參數進行細胞定性和定量分析以及細胞分選純化。應用于細胞周期和DNA倍體分析、凋亡檢測、細胞免疫表型分析、細胞因子的測定等方面。
DAB染色法也叫二氨基聯苯胺法，用于檢測細胞中過氧化物酶的活性部位。
原理：細胞顆粒中的過氧化物酶，能將過氧化氫中的氧釋放出來，氧化二氨基聯苯胺，形成金黃色沉淀而定位于過氧化物酶活性的部位。
使用前先用蒸餾水將B顯色液（1:25）稀釋為工作液，然后按比例（1:25）加入A顯色液，混勻后立即使用。
顯色時間1-30分鐘，顯色時間過長可引起本底增高，故應密切觀察顯色過程（一般3-10分鐘最理想），并在本底較淺且達到適當顯色強度時以流水漂洗終止顯色反應。
擴展資料：
DAB溶液應低溫密封保存。如有結晶析出，應確保結晶完全溶解再行使用；顯色工作液應現用現配，新鮮配制的工作液應為無色或淺棕色，如顏色過深，請勿使用。
DAB在常溫下不穩定，每次取用后均應及時加蓋密封放回冰箱，以免因DAB分解影響實驗，或因滲漏造成實驗環境污染；DAB有潛在致突變作用，操作時應注意穿戴好防護用具。
DAB染色法也叫二氨基聯苯胺法，用于檢測細胞中過氧化物酶的活性部位。
原理：細胞顆粒中的過氧化物酶，能將過氧化氫中的氧釋放出來，氧化二氨基聯苯胺，形成金黃色沉淀而定位于過氧化物酶活性的部位。
使用前先用蒸餾水將B顯色液（1:25）稀釋為工作液，然后按比例（1:25）加入A顯色液，混勻后立即使用。
顯色時間1-30分鐘，顯色時間過長可引起本底增高，故應密切觀察顯色過程（一般3-10分鐘最理想），并在本底較淺且達到適當顯色強度時以流水漂洗終止顯色反應。
二氨基聯苯胺檢測注意事項
1、DAB溶液應低溫密封保存。如有結晶析出，應確保結晶完全溶解再行使用；
2、顯色工作液應現用現配，新鮮配制的工作液應為無色或淺棕色，如顏色過深，請勿使用；
3、DAB在常溫下不穩定，每次取用后均應及時加蓋密封放回冰箱，以免因DAB分解影響實驗，或因滲漏造成實驗環境污染；
4、DAB有潛在致突變作用，操作時應注意穿戴好防護用具。
以上內容參考 百度百科——二氨基聯苯胺
DAB染色法也叫二氨基聯苯胺法，用于檢測細胞中過氧化物酶的活性部位。
原理：細胞顆粒中的過氧化物酶，能將過氧化氫中的氧釋放出來，氧化二氨基聯苯胺（DAB），形成金黃色沉淀而定位于過氧化物酶活性的部位。
產品適用范圍該產品用于免疫組化染色，應用在Dako 自動染色系統上。
產品性能結構及組成試劑瓶A: 過氧化物酶標記物：過氧化物酶葡聚糖聚合物，Tris/HCl, 氯化鈉, 牛血清白蛋白,5-溴-5-硝基-1,3-二惡烷, 4-氨基安替比林，聚乙二醇(PEG 3000), 酪蛋白， 吐溫 20 pH7.6。 試劑瓶B:DAB底物緩沖液：咪唑, N,N'-乙基雙(2-[2-羥基苯基]甘氨酸)(EDHPA), 乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P-40),過氧化氫, 氯化苯二甲烴銨, pH 7.5。 試劑瓶C:DAB顯色劑：3,3二氨基聯苯胺四氯化碳溶于80%丙二醇中
免疫組化原理
免疫組化染色是用一抗與被檢測組織中目的蛋白抗原結合，然后用HRP等標記的二抗與一抗進行結合，最后通過與DAB顯色劑反應，進而確認所要檢測蛋白抗原的定位、半定量等目的。
免疫組化更多的意義在于查看目的蛋白的定位。定量一般用western來實現。
免疫組化染色和HE染色的不同之處可能是HE染色比較粗略地辨認不同細胞形態學改變；而后者能夠針對特異性細胞標志物來檢測特異性細胞的改變（數量）、也可檢測細胞內細胞因子的轉位，組織中一些特異性蛋白的表達的量改變（通過圖像分析系統分析顏色深淺、分布的面積等綜合分析）。
通俗的講，HE僅僅是看大體病理改變，比如組織壞死，比如炎性滲出。免疫組化，看你的目的蛋白的表達情況。
免疫組化和****HE****染色的對比
DAB和HE一樣也是一種染色劑，HE染色相對簡單，能分辨出細胞中的嗜酸嗜堿性物質；DAB染色全稱應該叫做免疫組化DAB染色，經過一系列復雜的生化反應后，DAB(二氨基聯苯胺)染色劑能將辣根過氧化物酶染成棕色。
常用的免疫組化染色方法:
組化用HRP的話，信號不夠強。通常用生物素標記HRP來增強信號。
1、 ABC法（卵白素-生物素-過氧化物酶復合物法）
ABC法是利用卵白素與生物素特有的高度親和力特性，與生物素化二抗結合，形成抗原＋特異性抗體＋生物素化二抗＋卵白素＋生物素＋HRP復合物，最后DAB顯色。
復合物配制：先將生物素與酶結合，形成生物素化HRP，以生物素化HRP與卵白素按一定比例混合，形成卵白素-生物素-過氧化物酶復合物。
2、 SP法（抗生物素蛋白鏈酶素-過氧化物酶復合物）
本身沒有連接生物素，但有兩個生物素親和力極高的結合位點，可以與二抗上的生物素結合，敏感性高，復合物不需要使用前混合，更為簡便。
3、 PAP法
4、 直接法
樣本制備
免疫組化結果分析
免疫組化結果的判斷原則：
1 、必須設陽性對照和陰性對照。
2 、 抗原表達必須在特定部位。
3 、 陰性結果不能視為抗原不表達。
免疫組化染色實驗組與對照組結果分析表
從表可以看出只有6、7實驗結果有意義。1-5均因對照組的結果已否定Ab的特異性或IHC技術操作存在錯誤等而使實驗結果失去意義，必須重復實驗或換用Ab。
染色失敗的幾種情況及原因:
1、 所染的全部切片均為陰性結果，包括陽性對照在內。
2、 所有切片均呈陽性反應。
3、 所有切片背景過深。
4、 陽性對照染色良好，檢測的陽性標本呈陰性反應。
所有切片呈陽性反應，其原因:
1、 切片在染色過程中抗體過濃，或干片了。
2、 緩沖液配置中未加氯化納和PH值不準確， 洗滌不徹底。
3、 使用已變色的呈色底物溶液，或呈色反 應時間過長。
4、 抗體溫育的時間過長。
5、 H 2 O 2 濃度過高，呈色速度過快且粘附劑太厚。
所有切片背景過深，其原因:
1、 內源性過氧化酶沒有完全阻斷。
2、 切片或涂片過厚。
3、 漂洗不夠。
4、 底物呈色反應過久。
5、 蛋白質封閉不夠或所用血清溶血。
6 、使用全血清抗體稀釋不夠。
陽性對照染色良好，檢測的陽性標本呈陰性反應。
最常見的原因:標本固定和處理不當。
注意事項：
1、 蘇木素復染時間需要摸索，尤其要考慮陽性染色的位置。
2、 切片脫蠟和水化要充分；加反應液時要覆蓋組織充分；每次加液前甩干洗滌液，但又防止干片。
3、 以下原因可能導致片子著色不均勻：
①脫蠟不充分?？梢?0℃烤20min，立即放入新鮮的二甲苯中。
②水化不全。應經常配制新鮮的梯度乙醇。
③抗體沒混勻。用移液器充分混勻一抗/二抗等試劑。④抗體孵育時，切片放傾斜。
⑤抗體孵育后PBS沖洗不充分。
⑥制片厚薄不均勻等問題。
⑦染片盒不平，切片傾斜。
4、 一抗的清洗:
1、單獨沖洗，防止交叉反應造成污染。
2、溫柔沖洗，防止切片的脫落，推薦用浸洗方式。
3、沖洗的時間要足夠，才能徹底洗去 結合的物質。
5、 PBS的PH和離子強度的使用：
1、建議PH在7.4-7.6濃度是0.01 M。
2、中性及弱鹼性條件（PH7-8）有利 于免疫復合物的形成，而酸性條件則有利于分解；低離子強度有利于免疫復合物的形成，而高離子強度則有利 于分解。
6、 拍照：
1、有條件的話應該立即拍照，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。
上一篇：甲魚塘多久測一次水質？
下一篇：體驗分娩的意義？